【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：大鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒

英文名稱：Rat Progesterone ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

96T/48T

【預期用途】

僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中孕酮（PROG）的濃度。

【檢驗原理】

本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗孕酮（PROG）抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入大鼠 孕酮（PROG）校準品和待測樣本，再加入HRP標記的大鼠 孕酮（PROG）抗原（酶標抗原），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-酶標抗原的免疫復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中大鼠 孕酮（PROG）的濃度負相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中大鼠 孕酮（PROG）的濃度。

【主要組成成分】

主要成分

標準品濃度依次為：16、8、4、2、1、0 ng/mL

本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為14天，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標儀。

【樣本要求】

樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反復凍融。

2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。

4、組織勻漿：用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將組織，剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎或反復凍融。最后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘，取上清檢測。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準備

1、使用前，所有的組分都要至少復溫30min，確保充分復溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

操作程序

1. 按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

2. 從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。設置標準品孔、空白孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本50μL。

3. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL。

4. 用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復5次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

6. 將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

7. 所有孔加入終止液50μL，在450波長的酶標儀上讀取各孔吸光度（OD值）。

【實驗結(jié)果計算】

檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。

如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。

6、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標】

1. 外觀和物理檢查:試劑盒應組分齊全，內(nèi)外包裝均應完整，標簽清晰，液體試劑無滲漏。各組分裝量不少于表1中要求。

2. 線性: 用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl），在1 ng/mL – 16 ng/mL范圍內(nèi)，劑量-反應曲線相關系數(shù)（r）的絕對值應不低于0.9900。

3. 精密度

3.1分析內(nèi)精密度:試劑盒質(zhì)控品測定結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應不大于15.0%。

3.2批間精密度:在三個不同批次產(chǎn)品之間，質(zhì)控品測定結(jié)果的變異系數(shù)（CV）應不大于15.0%

4.  蕞低檢出限:蕞低檢測濃度小于0.1 ng/mL。

5. 質(zhì)控品測定值: 每次檢測結(jié)果均應在允許范圍內(nèi)。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后洗手。

技術提示

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關規(guī)定對待所有的廢物和污物。

大鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒

南京億迅生物科技有限公司出品的各類ELISA試劑盒。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，價格實惠，在國內(nèi)各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類產(chǎn)品還有大鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒，大鼠白細胞介素4(IL-4)ELISA試劑盒，大鼠白細胞介素5(IL-5)ELISA試劑盒，小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)ELISA試劑盒等。

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